时间分辨荧光分析法(Time resolved fluoroisnmunoassay, TRFIAIA)利用了荧光的波长与其激发波长的巨大差异克服了普通紫外-可见分光分析法中杂色光对检测的干扰。
TRFIAIA定量检测乙肝病毒“两对半”为临床诊断乙肝提供了新手段,有助于临床客观的分析HBV感染情况、疗效的观察和转归等情况的分析。
附“乙肝二对半”的临床意义
1. 极大地提高了检测的灵敏度
TRFIAIA检测HBsAg灵敏度可达0.2ng/ml,而酶标(EIASA)检测的灵敏度是2ng/ml,极大地提高检测的灵敏度。因此,在急性乙肝早期能及早检出HBsAg,确证HBV感染,缩短窗口期;其次,可发现低浓度HBsAg携带者;在部分慢性乙肝患者中,由于机体缺乏对HBV包膜蛋白的免疫应答,HBsAg表达较低,酶标检测可出现HBsAg和 HBsAb均阴性的情况,TRFIA技术则可避免这些情况的发生,为正确判断病情提供依据。
2. 能动态观察疗效和监测病情
1) 定量分析HBsAg和 HBsAb的浓度变化,可预见急性乙肝是否处于恢复期。如HBsAg浓度降低,HBsAb浓度逐渐升高,可说明病情正往恢复期发展;反之,HBsAg浓度处于较高水平或上升趋势,而HBsAb一直处于较低水平,则易发展为慢性乙肝或病毒携带者。
2) 定量分析HBeAg和HBeAb的浓度变化,可反映病情变化和治疗效果。定量测定能明确检测HBeAg向HBeAb转换的时期,即表现为HBeAg浓度下降和HbeAb升高的过程。高浓度的HBeAg还可间接提示病毒处于高复制状态,具有较高的传染性。高浓度的HBeAb一方面提示病情好转,而在某些时候(如肝功能指标很差)则可能与肝坏死、肝硬化、肝癌有关。
3) HBcAb浓度的高低可反映病毒感染的状态。高浓度的抗-Hbc提示乙肝急性感染,恢复期浓度降低。慢性乙肝呈抗-Hbc持续高浓度。而低浓度的抗-Hbc一般为恢复期或既往感染。
4) 有利于对慢性肝炎活动性或非活动性的判断。非活动性慢性乙肝各项指标相对稳定,活动性往往呈现进行性变化。
3. TRFIAIA和定量PCR技术可互相补充
血清HBV—DNA荧光定量PCR测定可以直接反映血液中病毒复制状态和病毒载量,具有很多临床应用价值,但不能完全反映病毒复制静息期肝细胞内HBV病毒状态。HBV-DNA阴性并不完全代表体内HBV已被清除,结合“两对半”各项指标更能客观反映体内HBV病毒状态。
4. HBsAb的定量测定能够对乙肝的预防起到监督作用
HBsAb的定量测定能够对抗体是否真正具有“中和”HBV的免疫力作出正确评价,对乙肝的预防起到监督作用。作定量检测,可根据HBsAb 的含量判断机体对HBV的免疫状态及乙肝疫苗的免疫效果。因此定量测定对乙肝疫苗免疫力的评价和高危人群预防免疫具有重要意义,特别是在少年儿童预防乙肝方面。
二、单克隆抗体金标法检测粪便等隐血
化学法(联苯胺法)是运用过氧化物酶试纸法作粪便隐血试验,特异性较差,受众多食物因素的影响,不能为临床正确判断是否有消化道出血提供准确信息。
单克隆抗体金标法检测便隐血是一种固相标记免疫测定新技术在检测大便隐血项目上的应用。它是将特异的人血红蛋白单克隆抗体包被于纤维素膜上,当标本中含有人血红蛋白时,形成的抗原抗体结合物聚集在检测带,通过可目测的胶体金标记物得到直观的显色结果。为一种特异性强、灵敏度高和抗干扰能力强的检测标本隐血的方法。